Beskrivelse
Ren og sikker optøning af celler
Optøning af celler er en daglig opgave i cellekultur- og mikrobiologilaboratorier. Normalt bruges et vandbad til denne opgave, men det giver mening at tænke på nye metoder og renere muligheder. En ren måde at optø cellelinjer og medium på flaske på er at bruge en termisk blok på en termisk mixer. Vi har sammenlignet begge metoder og viser fordelene ved at gentænke din celleoptøning.
Vandbadet er i øjeblikket standarden for optøning af cellelinjer. Det findes i de fleste laboratorier og er altid opvarmet til 37 °C. Fleksibiliteten til at bruge mange forskellige laboratoriebeholdere, herunder større flasker, er ubestridt. Men det har også nogle ulemper for brugeren og cellerne. Kontinuerlig drift af vandbadet, ofte med åbent låg, fordi store beholdere opvarmes med mediet, fører til et højt energiforbrug. Desuden er brugen af kemikalier til at desinficere vandet kontroversiel. Men hvis de ikke bruges, er der risiko for kontaminering. Vandsprøjt ved indsættelse og fjernelse af kar kan således forurene andre kar. Alle kar bliver våde og skal tørres og desinficeres, før de kan bruges i sterilbænken. Brugerens hænder kan også blive våde og skal tørres og desinficeres korrekt. Handskerne skal skiftes, når karrene fjernes. Desuden er det dyrt at rengøre et vandbad. I løbet af denne tid kan det ikke bruges. Afhængigt af modellen er den efterfølgende opvarmningstid et par minutter til en time eller længere.

Vi sammenlignede de to metoder til optøning i vandbad og i Eppendorf SmartBlock™ cryo thaw med forskellige cellelinjer og præsenterede resultaterne i performance sheets. Der blev brugt HEK293-, CHO-K1-, S16-, episomale humane iPSC-celler og mono-alleliske mEGFP-mærkede TOMM20 WTC hiPSC-celler. Alle test viste sammenlignelig eller bedre cellelevedygtighed end vandbadet efter optøningsprocessen. Afvigelserne fra middelværdien af cellelevedygtigheden var for det meste lavere ved brug af SmartBlock kryooptøning end ved brug af vandbadet. I tilfælde af mono-alleliske mEGFP-mærkede TOMM20 WTC hiPS-celler kunne pluripotens også påvises efter 4 vellykkede passager efter optøningsprocessen i Eppendorf ThermoMixer® C med Eppendorf SmartBlock kryooptøning.

Det optimerede optøningsprogram for Eppendorf ThermoMixer C med SmartBlock cryo optøning optøer 1-2 ml celler frosset ved -80 °C inden for 3-4 minutter med op til 100 % cellelevedygtighed med minimale rystebevægelser (500 o/min). Programmet er reproducerbart, er ikke udsat for temperatursvingninger og er energimæssigt gunstigt på grund af den samlede hastighed. Risikoen for kontaminering minimeres, da hvert rør optøs tørt i sin egen brønd. Eppendorf SmartBlock cryo thaw giver mulighed for at bruge op til 24 cryo-beholdere på samme tid. På den måde kan flere brugere sikkert optø deres celler på samme tid. Desuden kan ThermoTop™ bruges til at opvarme prøverne ovenfra for at undgå kondensering. Dermed forbliver koncentrationen af ingredienser i mediet den samme.
Hvis det er nødvendigt, kan SmartBlock Cryo thaw nemt rengøres med desinfektionsmiddel, og efter et par minutter er den klar til brug igen.
Mediet kan overføres til koniske rør på 15, 25 eller 50 ml og opvarmes i en passende termoblok. Det betyder, at kun den mængde, der rent faktisk er brug for, optøs. Risikoen for kontaminering reduceres også her i forhold til at bruge hele flasken, og der bortskaffes mindre medium.
Sammenfattende kan det siges, at reproducerbar, ren optøning af medium og celler med fremragende cellelevedygtighed i en termomixer er mulig og anbefales. Det forenkler og fremskynder det daglige laboratoriearbejde.




